|  | | 牛胚胎移植技术要领
[第一食品网 2008-7-11 14:20:00] |
| | | "胚胎移植（EmbryoTransfer，简称ET）"是指对生产性能优良和遗传性稳定的母牛经过超数排卵处理后，将多出自然排卵数几倍的受精卵取出，分别移植到生产性能较低和遗传性差的母牛子宫内，使其着床、妊娠、并产出优良后代的技术。供给胚胎的母畜通常称为供体，接受和孕育胚胎的母畜称为受体。经胚胎移植出生的后代是从供体母畜和与供体母畜交配的公畜那里获得的遗传基因。所以，胚胎移植实际上就是产生胚胎的供体和养育胚胎的受体分工合作共同繁殖后代的过程。因此，它对充分发挥优良母牛的繁殖潜力，推广利用优良雌性配子，加速畜群改良等，都有极其重要的实际生产价值，在动物遗传学和繁殖生理学的研究中也具有重要作用。
奶牛胚胎移植的过程中包括超数排卵、胚胎的采集、胚胎的鉴定保存和胚胎移植。
1超数排卵
也称"超排"。指将供体母牛经激素处理，使其发情、并能排出数量较多的发育成熟的卵子，经合理的人工授精方法，以获得数量稳定的可移植的胚胎。
1.1注射促卵泡素（PSH）
母牛发情后9～13d开始肌肉注射促卵泡素（PSH），每次剂量为50IU，每天两次，每次间隔12h，连续注射4d，共8次。在首次注射促卵泡素（FSH）后的72h，肌肉注射氯前列烯醇0.6mg。经观察，母牛在首次用氯前列烯醇后的30～60h相继出现发情。
1.2超排牛的发情观察
对处理的母牛应认真观察发情表现，每天应观察2～3次，由于牛群中出现较多的相互爬跨母牛，为确保准确，可用开膣器检查，当子宫颈口充分开张，并有适量粘液流出即为发情。当母牛接受其它牛爬跨时开始推算人工授精时间。
1.3超排母牛的人工授精
超排母牛的人工授精时间和授精次数报道不一，有在超排母牛发情后的12h或24h授精的，有在用氯前列烯醇处理后的48h授精的。关于授精次数上，有1次输精的，有3次（8h、16h，24h）输精的，一般认为，超排母牛增加入工授精次数可以提高母牛超排卵子的受精率。
1.4超排效果
超排数目与激素剂量有关，剂量过大，排卵数过多，易损伤卵巢功能。通常，以每次母牛排卵10个左右为宜;当排卵数在11～21个时，可使受精率、回收率和受胎率下降。
2胚胎采集
也称为"采卵"。通常胚胎采集的时间是母牛发情后3～7d。胚胎收集的方法有手术和非外科手术法两种。其中非外科采集法已普遍采用。多用德式二路采卵管非手术采集胚胎。
2.1术前准备
母牛站立保定。局部麻醉或用低剂量的全身麻醉药使其安静。掏出直肠内的蓄积的粪便。用0.1%新洁尔灭液充分、彻底洗洁母牛后躯，再用75%酒精擦拭阴门。
2.2采卵管的导入
在二路采卵管内插入不锈钢内芯使之挺直，将挺直的采卵管导入阴道达阴道穹窿，另一只手在直肠内协助。慢慢将导管插入子宫体，到子宫角内5cm左右，拔出采卵管内的内芯约2cm，再使采卵管沿子宫角弯曲方向进入子宫角深部。在这一过程中，助手每抽出约2cm的内芯，术者将采卵管向子宫内送入相应的长度，直到将采卵管送到子宫角适当的位置。采卵管中的一路为"气路"，即通过它向气球内充气;另一路为"水路"。即向子宫内灌注和回收冲卵液。充气后的气球可将子宫角固定于子宫角大弯附近。此时，将采卵管内的不锈钢内芯全部抽出。
2.3冲卵液的回收
首先用50mL注射器将20～30mL冲卵液通过采卵管注入子宫角，再将冲卵液吸入到注射器内。冲卵液由20mL逐渐增加到50mL，每侧子宫角共用冲卵液500mL。回收的冲卵液轻轻注入到500mL的集卵杯内，静置30min，徐徐吸去上部液体，将剩余的30mL冲卵液分别置于多个直径为10cm的平皿中，在显微镜下逐个检查，已检查出的胚胎将其移入到培养液中保存。
3胚胎鉴定保存
冲出来的胚胎首先应采用形态学观察和体外培养相结合的方法进行质量评定，最后才能确定其是否为可移植胚胎。形态学观察在实体显微镜下进行，放大80倍。可移植胚胎的标准是胚胎发育与采集日期一致：形态典型，透明带完整或损伤轻微;胚胎结构清楚，或缺陷轻微：细胞突出胚胎整体部分或色泽发暗部分不超过胚胎总体积的1/5。体外培养：将色泽发暗比例过大或细胞突出胚胎整体过多的胚胎置于37℃培养2～4h，若其发育者为可移植胚。
4移植技术
移植技术有外科方法和非外科方法两种。现普遍应用的是非外科移植。胚胎移入时首先要确定卵巢是否有黄体。胚胎移入时，在不损伤子宫内膜的情况下，尽可能的移入子宫角深部，这样可以得到理想的妊娠率。将胚胎移入子宫角深部可以使胚胎发出识别信号，抑制子宫产生前列腺素，这样黄体就不会被溶解，从而有利于胚胎着床。移植枪在伸入子宫角时要轻轻往上捻，不能硬往里捅，否则会造成子宫内膜的损伤。一些移植人员在一点儿都不损伤子宫内膜的情况下，可以得到70%的妊娠率。但对于那些缺乏经验的操作者，由于子宫内膜的损伤，往往会造成极高的流产率。移植枪是金属制作的，顶部圆滑，而且胚胎是从顶部两侧的小孔被推入子宫角的，这种枪可以避免对子宫造成伤害。
来源：《吉林畜牧兽医》 | | | | | | 免责声明：本文发布标题及内容，来自其他正规网络媒体，仅供参考、研究使用，不代表本站相关立场。
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